Biocolor 可溶性膠原檢測試劑盒
采用與膠原特異性結合的Sircol染料,主要用於定量檢測哺乳動物組織中抽提的酸溶性膠原和體外培養哺乳動物細胞釋放到培養基中的膠原。
溶於酸、胃蛋白等的可溶性膠原均可檢測,具體可檢測的膠原類型為I-V型,VI-XIV型膠原也可檢測,但由於難以製備標準曲線,還無法定量。Sircol染料不能區分不同類型的膠原,但可與膠原的[Gly-X-Y]n螺旋結構特異性地結合。隨著膠原變性為凝膠,該染料與膠原的結合力減弱。非脊椎動物與膠原由於變性溫度較低、羥脯氨酸殘基較少等原因,結合染料的能力較弱,需要製備種屬特異性的純化標準品,以繪製標準曲線。
1.繪製標準曲線
Product Code: S1000 110 assays
Product Code: S5000 440 assays
Biocolor Sircol Soluble Collagen Assay
實驗步驟
2.待測樣本的製備:取50ul樣本容易調整體積到100ul進行反應。根據反應的結果對樣本濃度進行調整,使其在標準曲線範圍內;
3.膠原—染料複合物的獲得:加入1ml Sircol染料,混勻離心後,既得膠原—染料複合物,棄 上清,去掉未結合的染料
4.加入1ml 染料釋放劑,將膠原—染料複合物中的染料釋放出來
5.吸光度測定:用分光光度計540nm出定量測定。或使用colorimeter測定
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可溶性膠原檢測試劑盒常見問題:
問:可溶性膠原檢測試劑盒(S1000,Sircol Soluble Collagen Assay)的靈敏度?答:≥1.0µg的膠原。如果樣本中的膠原含量很低,可參考protocol,進行膠原的分離和富集,有詳細的膠原富集步驟,見第5頁;
問:使用可溶性膠原檢測試劑盒(S1000,Sircol Soluble Collagen Assay)檢測膠原所需時間?
答:1.5小時左右;
問:可溶性膠原檢測試劑盒(S1000)可檢測到的膠原樣式?
答:酸可溶性或胃蛋白酶可溶性膠原;
問:可溶性膠原檢測試劑盒(S1000)可檢測到的膠原類型?
答:哺乳動物膠原 I-V型;
問:樣品檢測的吸光度值?
答:一般來說,520-570nm處檢測均可,555nm處會獲得*大吸收光譜;
問:如何準備樣品進行可溶性膠原檢測?
答:無論是細胞培養物或者是組織樣本,都有詳細的準備步驟,詳見protocol第3-4頁

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